1. Scopo: La presente procedura ha lo scopo di fornire una procedura standardizzata per le operazioni asettiche e la protezione delle camere sterili.
2. Ambito di applicazione: laboratorio di analisi biologiche
3. Persona responsabile: Supervisore del controllo qualità/Tester
4. Definizione: Nessuna
5. Precauzioni di sicurezza
Eseguire rigorosamente le operazioni asettiche per prevenire la contaminazione microbica; gli operatori devono spegnere la lampada UV prima di entrare nella camera sterile.
6. Procedure
6.1. La sala sterile deve essere dotata di una sala operatoria sterile e di una stanza tampone. La pulizia della sala operatoria sterile deve raggiungere la classe 10000. La temperatura interna deve essere mantenuta tra 20 e 24 °C e l'umidità tra il 45 e il 60%. La pulizia del banco sterile deve raggiungere la classe 100.
6.2. La camera sterile deve essere mantenuta pulita ed è severamente vietato accumulare detriti per evitare contaminazioni.
6.3. Prevenire rigorosamente la contaminazione di tutte le apparecchiature di sterilizzazione e dei terreni di coltura. Chi risultasse contaminato deve cessare immediatamente di utilizzarlo.
6.4. La camera sterile deve essere dotata di disinfettanti a concentrazione di lavoro, come ad esempio soluzione di cresolo al 5%, alcol al 70%, soluzione di clormetionina allo 0,1%, ecc.
6.5. La camera sterile deve essere regolarmente sterilizzata e pulita con un disinfettante appropriato per garantire che la pulizia della camera sterile soddisfi i requisiti.
6.6. Tutti gli strumenti, le apparecchiature, i piatti e gli altri oggetti che devono essere introdotti in una stanza sterile devono essere avvolti ermeticamente e sterilizzati con metodi appropriati.
6.7. Prima di entrare in una camera sterile, il personale deve lavarsi le mani con sapone o disinfettante, quindi indossare indumenti da lavoro speciali, scarpe, cappelli, mascherine e guanti nella stanza tampone (oppure disinfettarsi nuovamente le mani con etanolo al 70%) prima di entrare nella camera sterile. Eseguire le operazioni nella camera batterica.
6.8. Prima di utilizzare la camera sterile, la lampada a raggi ultravioletti presente nella camera sterile deve essere accesa per irradiazione e sterilizzazione per più di 30 minuti, e contemporaneamente deve essere attivato il sistema di ventilazione del banco pulito. Al termine dell'operazione, la camera sterile deve essere pulita tempestivamente e quindi sterilizzata con luce ultravioletta per 20 minuti.
6.9. Prima dell'ispezione, l'imballaggio esterno del campione di prova deve essere mantenuto intatto e non deve essere aperto per evitare contaminazioni. Prima dell'ispezione, disinfettare la superficie esterna con batuffoli di cotone imbevuti di alcol al 70%.
6.10. Durante ogni operazione, è necessario effettuare un controllo negativo per verificare l'affidabilità del funzionamento asettico.
6.11. Quando si aspira un liquido contenente batteri, è necessario utilizzare una pallina di aspirazione. Non toccare la cannuccia direttamente con la bocca.
6.12. L'ago da inoculazione deve essere sterilizzato alla fiamma prima e dopo ogni utilizzo. Dopo il raffreddamento, è possibile inoculare la coltura.
6.13. Le cannucce, le provette, le piastre di Petri e gli altri utensili contenenti liquido batterico devono essere immersi in un secchio di sterilizzazione contenente una soluzione di Lysol al 5% per la disinfezione, e dopo 24 ore devono essere estratti e risciacquati.
6.14. In caso di fuoriuscita di liquido batterico su un tavolo o sul pavimento, versare immediatamente una soluzione di acido fenico al 5% o Lysol al 3% sulla zona contaminata e lasciare agire per almeno 30 minuti prima di procedere al trattamento. Qualora indumenti da lavoro e cappelli vengano contaminati da fluidi batterici, è necessario toglierli immediatamente e lavarli dopo la sterilizzazione a vapore ad alta pressione.
6.15. Tutti gli oggetti contenenti batteri vivi devono essere disinfettati prima di essere risciacquati sotto il rubinetto. È severamente vietato inquinare la rete fognaria.
6.16. Il numero di colonie nella camera sterile deve essere controllato mensilmente. Con il banco pulito aperto, prendere alcune piastre di Petri sterili con un diametro interno di 90 mm e iniettarvi asepticamente circa 15 ml di terreno di coltura agarizzato fuso e raffreddato a circa 45 °C. Dopo la solidificazione, capovolgere la piastra e incubare per 48 ore in un incubatore a 30-35 °C. Dopo aver verificato la sterilità, prendere da 3 a 5 piastre e posizionarle a sinistra, al centro e a destra della postazione di lavoro. Dopo aver aperto il coperchio ed averle lasciate esposte per 30 minuti, capovolgerle e incubarle per 48 ore in un incubatore a 30-35 °C, quindi estrarle ed esaminarle. Il numero medio di batteri vari sulla piastra in un'area pulita di classe 100 non deve superare 1 colonia, mentre il numero medio in una camera bianca di classe 10000 non deve superare 3 colonie. Se il limite viene superato, la camera sterile deve essere disinfettata a fondo fino a quando le ispezioni ripetute non soddisfano i requisiti.
7. Fare riferimento al capitolo (Metodo di ispezione della sterilità) in "Metodi di ispezione igienica dei farmaci" e "Procedure operative standard cinesi per l'ispezione dei farmaci".
8. Reparto Distribuzione: Reparto Gestione Qualità
Linee guida tecniche per le camere bianche:
Dopo aver ottenuto un ambiente sterile e materiali sterili, è fondamentale mantenere tale stato per poter studiare un microrganismo specifico o sfruttarne le funzioni. In caso contrario, diversi microrganismi esterni potrebbero facilmente contaminare l'ambiente. Questo fenomeno, ovvero la contaminazione da microrganismi estranei, è chiamato in microbiologia "batteri contaminanti". Prevenire la contaminazione è una tecnica cruciale nel lavoro microbiologico. La sterilizzazione completa, da un lato, e la prevenzione della contaminazione, dall'altro, rappresentano due aspetti fondamentali della tecnica asettica. Inoltre, è necessario impedire che i microrganismi oggetto di studio, in particolare quelli patogeni o geneticamente modificati (non presenti in natura), fuoriescano dai contenitori sperimentali e si disperdano nell'ambiente esterno. A tal fine, in microbiologia esistono numerose misure.
La camera sterile è solitamente una piccola stanza appositamente allestita in un laboratorio di microbiologia. Può essere costruita con pannelli di vetro e lastre. La sua superficie non deve essere eccessiva, circa 4-5 metri quadrati, e l'altezza deve essere di circa 2,5 metri. All'esterno della camera sterile deve essere presente una stanza tampone. Le porte della stanza tampone e della camera sterile non devono essere rivolte nella stessa direzione per evitare che il flusso d'aria introduca batteri estranei. Sia la camera sterile che la stanza tampone devono essere a tenuta d'aria. L'impianto di ventilazione interno deve essere dotato di dispositivi di filtrazione dell'aria. Il pavimento e le pareti della camera sterile devono essere lisci, difficili da sporcare e facili da pulire. Il piano di lavoro deve essere livellato. Sia la camera sterile che la stanza tampone sono dotate di lampade a raggi ultravioletti. Le lampade a raggi ultravioletti nella camera sterile sono posizionate a 1 metro di distanza dal piano di lavoro. Il personale che entra nella camera sterile deve indossare indumenti e cuffie sterilizzati.
Attualmente, le camere sterili si trovano principalmente negli stabilimenti di microbiologia, mentre i laboratori generici utilizzano banchi a flusso laminare. La funzione principale del banco a flusso laminare è quella di rimuovere le varie particelle di polvere, inclusi i microrganismi, presenti sulla superficie di lavoro. Il dispositivo elettrico fa passare l'aria attraverso un filtro HEPA e la convoglia sulla superficie di lavoro, mantenendola costantemente sotto il controllo di un flusso d'aria sterile. Inoltre, una barriera d'aria ad alta velocità sul lato esterno impedisce l'ingresso di aria contaminata da batteri.
In ambienti con condizioni difficili, al posto del banco sterile si possono utilizzare anche box sterili in legno. Il box sterile ha una struttura semplice ed è facile da spostare. Presenta due aperture sul lato anteriore, bloccate da sportelli a spinta quando non in uso. È possibile inserire le braccia all'interno durante l'operazione. La parte superiore frontale è dotata di vetro per facilitare le operazioni interne. All'interno del box è presente una lampada a raggi ultravioletti e gli strumenti e i batteri possono essere introdotti attraverso un piccolo sportello laterale.
Le tecniche operative asettiche svolgono attualmente un ruolo fondamentale non solo nella ricerca e nelle applicazioni microbiologiche, ma sono anche ampiamente utilizzate in molte biotecnologie. Ad esempio, la tecnologia transgenica, la tecnologia degli anticorpi monoclonali, ecc.
Data di pubblicazione: 6 marzo 2024