1. Scopo: questa procedura mira a fornire una procedura standardizzata per le operazioni asettiche e la protezione delle stanze sterili.
2. Ambito di applicazione: laboratorio di analisi biologiche
3. Persona responsabile: Supervisore QC Tester
4.Definizione: Nessuna
5. Precauzioni di sicurezza
Eseguire rigorosamente le operazioni asettiche per prevenire la contaminazione microbica; gli operatori devono spegnere la lampada UV prima di entrare nella stanza sterile.
6. Procedure
6.1. La sala sterile deve essere dotata di una sala operatoria sterile e di una sala tampone. La pulizia della sala operatoria sterile deve raggiungere la classe 10000. La temperatura interna deve essere mantenuta tra 20 e 24 °C e l'umidità tra il 45 e il 60%. La pulizia del banco sterile deve raggiungere la classe 100.
6.2. La stanza sterile deve essere mantenuta pulita ed è severamente vietato accumulare detriti per evitare contaminazioni.
6.3. Prevenire rigorosamente la contaminazione di tutte le apparecchiature di sterilizzazione e dei terreni di coltura. Quelli contaminati devono interromperne l'uso.
6.4. La stanza sterile deve essere dotata di disinfettanti a concentrazione efficace, come soluzione di cresolo al 5%, alcol al 70%, soluzione di clormetionina allo 0,1%, ecc.
6.5. La stanza sterile deve essere regolarmente sterilizzata e pulita con un disinfettante appropriato per garantire che la pulizia della stanza sterile soddisfi i requisiti.
6.6. Tutti gli strumenti, gli utensili, le stoviglie e gli altri oggetti che devono essere portati nella stanza sterile devono essere imballati strettamente e sterilizzati con metodi appropriati.
6.7. Prima di entrare nella stanza sterile, il personale deve lavarsi le mani con sapone o disinfettante e poi indossare speciali abiti da lavoro, scarpe, cappelli, maschere e guanti nella stanza tampone (o asciugarsi nuovamente le mani con etanolo al 70%) prima di entrare nella stanza sterile. Eseguire le operazioni nella camera batterica.
6.8. Prima di utilizzare la camera sterile, la lampada ultravioletta nella camera sterile deve essere accesa per irradiazione e sterilizzazione per più di 30 minuti e il banco di sterilizzazione deve essere acceso contemporaneamente per il soffiaggio dell'aria. Al termine dell'operazione, la camera sterile deve essere pulita tempestivamente e poi sterilizzata con luce ultravioletta per 20 minuti.
6.9. Prima dell'ispezione, l'imballaggio esterno del campione di prova deve essere mantenuto intatto e non deve essere aperto per evitare contaminazioni. Prima dell'ispezione, utilizzare batuffoli di cotone imbevuti di alcol al 70% per disinfettare la superficie esterna.
6.10. Durante ogni operazione, deve essere effettuato un controllo negativo per verificare l'affidabilità del funzionamento asettico.
6.11. Per assorbire il liquido batterico, è necessario utilizzare una ventosa. Non toccare la cannuccia direttamente con la bocca.
6.12. L'ago per l'inoculazione deve essere sterilizzato alla fiamma prima e dopo ogni utilizzo. Dopo il raffreddamento, la coltura può essere inoculata.
6.13. Le cannucce, le provette, le piastre di Petri e gli altri utensili contenenti liquido batterico devono essere immersi in un secchio di sterilizzazione contenente una soluzione di Lysol al 5% per la disinfezione, quindi estratti e risciacquati dopo 24 ore.
6.14. In caso di versamento di liquido batterico sul tavolo o sul pavimento, versare immediatamente una soluzione di acido fenico al 5% o di Lysol al 3% sulla zona contaminata per almeno 30 minuti prima di procedere al trattamento. Se abiti da lavoro e cappelli sono contaminati da liquido batterico, devono essere tolti immediatamente e lavati dopo la sterilizzazione a vapore ad alta pressione.
6.15. Tutti gli oggetti contenenti batteri vivi devono essere disinfettati prima di essere risciacquati sotto il rubinetto. È severamente vietato inquinare le fognature.
6.16. Il numero di colonie nella stanza sterile deve essere controllato mensilmente. Con il banco pulito aperto, prendere un certo numero di piastre Petri sterili con un diametro interno di 90 mm e iniettare asetticamente circa 15 ml di terreno di coltura agar nutriente fuso e raffreddato a circa 45 °C. Dopo la solidificazione, capovolgere le piastre a 30-35 °C. Incubare per 48 ore in un incubatore a ℃. Dopo aver verificato la sterilità, prendere da 3 a 5 piastre e posizionarle a sinistra, al centro e a destra della posizione di lavoro. Dopo aver aperto il coperchio ed esposto le piastre per 30 minuti, capovolgerle in un incubatore a 30-35 °C per 48 ore ed estrarle. Esaminare. Il numero medio di batteri vari sulla piastra in un'area pulita di classe 100 non deve superare 1 colonia e il numero medio in una stanza pulita di classe 10000 non deve superare 3 colonie. Se il limite viene superato, la stanza sterile deve essere disinfettata accuratamente finché le ripetute ispezioni non soddisfano i requisiti.
7. Fare riferimento al capitolo (Metodo di ispezione della sterilità) in "Metodi di ispezione igienica dei farmaci" e "Pratiche operative standard cinesi per l'ispezione dei farmaci".
8. Reparto Distribuzione: Reparto Gestione Qualità
Guida tecnica per la camera bianca:
Dopo aver ottenuto un ambiente sterile e materiali sterili, dobbiamo mantenere uno stato sterile per poter studiare uno specifico microrganismo noto o sfruttarne le funzioni. In caso contrario, diversi microrganismi provenienti dall'esterno potrebbero facilmente mescolarsi. Il fenomeno della miscelazione di microrganismi irrilevanti provenienti dall'esterno è chiamato batteri contaminanti in microbiologia. Prevenire la contaminazione è una tecnica fondamentale nel lavoro microbiologico. La sterilizzazione completa da un lato e la prevenzione della contaminazione dall'altro sono due aspetti della tecnica asettica. Inoltre, dobbiamo impedire che i microrganismi in studio, in particolare i microrganismi patogeni o i microrganismi geneticamente modificati che non esistono in natura, fuoriescano dai nostri contenitori sperimentali nell'ambiente esterno. A tal fine, in microbiologia, esistono numerose misure.
La camera sterile è solitamente una piccola stanza appositamente allestita nei laboratori di microbiologia. Può essere realizzata con lastre e vetro. L'area non deve essere troppo grande, circa 4-5 metri quadrati, e l'altezza deve essere di circa 2,5 metri. All'esterno della camera sterile deve essere allestita una camera tampone. La porta della camera tampone e quella della camera sterile non devono essere rivolte nella stessa direzione per impedire al flusso d'aria di introdurre batteri di varia natura. Sia la camera sterile che la camera tampone devono essere ermetiche. Le apparecchiature di ventilazione interna devono essere dotate di dispositivi di filtraggio dell'aria. Il pavimento e le pareti della camera sterile devono essere lisci, difficili da trattenere lo sporco e facili da pulire. La superficie di lavoro deve essere piana. Sia la camera sterile che la camera tampone sono dotate di lampade a raggi ultravioletti. Le lampade a raggi ultravioletti nella camera sterile sono posizionate a 1 metro dalla superficie di lavoro. Il personale che entra nella camera sterile deve indossare indumenti e cappelli sterilizzati.
Attualmente, le camere sterili sono presenti principalmente negli stabilimenti di microbiologia, mentre i laboratori generici utilizzano i cosiddetti "clean bench". La funzione principale del clean bench è quella di utilizzare un dispositivo a flusso d'aria laminare per rimuovere varie polveri sottili, inclusi i microrganismi, dalla superficie di lavoro. Il dispositivo elettrico consente all'aria di passare attraverso il filtro HEPA e quindi di entrare nella superficie di lavoro, in modo che quest'ultima sia sempre sotto il controllo del flusso di aria sterile. Inoltre, è presente una barriera d'aria ad alta velocità sul lato più vicino all'esterno per impedire l'ingresso di aria batterica esterna.
In luoghi con condizioni difficili, è possibile utilizzare anche box sterili in legno al posto del banco di lavoro. Il box sterile ha una struttura semplice ed è facile da spostare. Ci sono due fori sulla parte anteriore del box, che sono bloccati da porte push-pull quando non in funzione. È possibile estendere le braccia durante l'uso. La parte superiore della parte anteriore è dotata di vetro per facilitare l'uso interno. All'interno del box è presente una lampada a raggi ultravioletti e utensili e batteri possono essere inseriti attraverso una piccola porta laterale.
Le tecniche operative asettiche non solo svolgono attualmente un ruolo fondamentale nella ricerca e nelle applicazioni microbiologiche, ma sono anche ampiamente utilizzate in molte biotecnologie, ad esempio nella tecnologia transgenica, nella tecnologia degli anticorpi monoclonali, ecc.
Data di pubblicazione: 06-03-2024