1. Scopo: questa procedura mira a fornire una procedura standardizzata per le operazioni asettiche e la protezione delle stanze sterili.
2. Ambito di applicazione: laboratorio di test biologici
3. Persona responsabile: Tester del supervisore QC
4.Definizione: nessuno
5. Precauzioni di sicurezza
Eseguire rigorosamente operazioni asettiche per prevenire la contaminazione microbica; Gli operatori devono spegnere la lampada UV prima di entrare nella stanza sterile.
6. Procedure
6.1. La stanza sterile dovrebbe essere dotata di una sala operatoria sterile e una sala tampone. La pulizia della sala operatoria sterile dovrebbe raggiungere la classe 10000. La temperatura interna dovrebbe essere mantenuta a 20-24 ° C e l'umidità dovrebbe essere mantenuta al 45-60%. La pulizia della panchina pulita dovrebbe raggiungere la classe 100.
6.2. La stanza sterile dovrebbe essere mantenuta pulita ed è severamente vietato accumulare detriti per prevenire la contaminazione.
6.3. Prevenire rigorosamente la contaminazione di tutte le attrezzature di sterilizzazione e dei mezzi di coltura. Quelli che sono contaminati dovrebbero smettere di usarli.
6.4. La stanza sterile dovrebbe essere dotata di disinfettanti di concentrazione di lavoro, come la soluzione di cresol al 5%, alcol al 70%, soluzione di clormetionina 0,1%, ecc.
6.5. La stanza sterile deve essere regolarmente sterilizzata e pulita con un disinfettante adeguato per garantire che la pulizia della stanza sterile soddisfi i requisiti.
6.6. Tutti gli strumenti, gli strumenti, i piatti e altri oggetti che devono essere portati nella stanza sterile devono essere strettamente avvolti e sterilizzati da metodi appropriati.
6.7. Prima di entrare nella stanza sterile, il personale deve lavarsi le mani con sapone o disinfettante, quindi trasformarsi in speciali abiti da lavoro, scarpe, cappelli, maschere e guanti in una stanza di cuscinetto (o asciugarsi di nuovo con il 70% di etanolo) prima di entrare nella stanza sterile. Eseguire operazioni nella camera batterica.
6.8. Prima di usare una stanza sterile, la lampada ultravioletta nella stanza sterile deve essere attivata per irradiazione e sterilizzazione per più di 30 minuti e la panca pulita deve essere attivata per il soffio d'aria contemporaneamente. Dopo il completamento dell'operazione, la stanza sterile deve essere pulita in tempo e quindi sterilizzata dalla luce ultravioletta per 20 minuti.
6.9. Prima dell'ispezione, l'imballaggio esterno del campione di prova deve essere mantenuto intatto e non deve essere aperta per prevenire la contaminazione. Prima dell'ispezione, utilizzare batuffoli di cotone alcolici al 70% per disinfettare la superficie esterna.
6.10. Durante ogni operazione, dovrebbe essere fatto un controllo negativo per verificare l'affidabilità dell'operazione asettica.
6.11. Quando si assottiglia il liquido batterico, è necessario usare una sfera di aspirazione per assorbila. Non toccare la cannuccia direttamente con la bocca.
6.12. L'ago di inoculazione deve essere sterilizzato per fiamma prima e dopo ogni uso. Dopo il raffreddamento, la cultura può essere inoculata.
6.13. Le cannucce, i tubi di prova, le piastre di Petri e altri utensili contenenti liquidi batterici devono essere immersi in un secchio di sterilizzazione contenente 5% di soluzione lysol per la disinfezione, e rimborsate e sciacquate dopo 24 ore.
6.14. Se c'è un liquido batterico versato su tavolo o pavimento, è necessario versare immediatamente una soluzione di acido carbolico del 5% o il 3% di lisolo sull'area contaminata per almeno 30 minuti prima di trattarlo. Quando i vestiti e i cappelli di lavoro sono contaminati da fluido batterico, dovrebbero essere rimossi immediatamente e lavati dopo la sterilizzazione del vapore ad alta pressione.
6.15. Tutti gli articoli contenenti batteri vivi devono essere disinfettati prima di essere sciacquati sotto il rubinetto. È severamente proibito di inquinare la fogna.
6.16. Il numero di colonie nella stanza sterile dovrebbe essere controllato mensilmente. Con la panca pulita aperta, prendi una serie di piastre di Petri sterili con un diametro interno di 90 mm e iniettano asetticamente circa 15 ml di terreno di coltura di agar nutrienti che è stato fuso e raffreddato a circa 45 ° C. Dopo la solidificazione, posizionarlo a testa in giù a 30-35 incubato per 48 ore in un incubatore ℃. Dopo aver provato la sterilità, prendere da 3 a 5 piastre e posizionarle a sinistra, al centro e a destra della posizione di lavoro. Dopo aver aperto il coperchio ed esponendoli per 30 minuti, posizionarli a testa in giù in un incubatore da 30 a 35 ° C per 48 ore e portarli fuori. esaminare. Il numero medio di batteri vari sulla piastra in un'area pulita di classe 100 non deve superare 1 colonia e il numero medio in una stanza pulita di classe 10000 non deve superare 3 colonie. Se il limite viene superato, la stanza sterile deve essere completamente disinfettata fino a quando le ispezioni ripetute non soddisfano i requisiti.
7. Fare riferimento al capitolo (metodo di ispezione della sterilità) in "Metodi di ispezione igienica della droga" e "Pratiche operative standard di China per l'ispezione dei farmaci".
8. Dipartimento di distribuzione: Dipartimento di gestione della qualità
Guida tecnica della stanza pulita:
Dopo aver ottenuto un ambiente sterile e materiali sterili, dobbiamo mantenere uno stato sterile al fine di studiare un microrganismo noto specifico o utilizzare le loro funzioni. Altrimenti, vari microrganismi dall'esterno possono facilmente mescolarsi. Il fenomeno della miscelazione di microrganismi irrilevanti dall'esterno è chiamato batteri contaminanti in microbiologia. Prevenire la contaminazione è una tecnica critica nel lavoro microbiologico. La sterilizzazione completa da un lato e la prevenzione della contaminazione dall'altro sono due aspetti della tecnica asettica. Inoltre, dobbiamo prevenire i microrganismi in studio, in particolare i microrganismi patogeni o i microrganismi geneticamente modificati che non esistono in natura, dalla fuga dai nostri contenitori sperimentali in ambiente esterno. Per questi scopi, in microbiologia, ci sono molte misure.
La stanza sterile è di solito una piccola stanza appositamente creata in laboratorio di microbiologia. Può essere costruito con lenzuola e vetro. L'area non dovrebbe essere troppo grande, circa 4-5 metri quadrati e l'altezza dovrebbe essere di circa 2,5 metri. Una sala tampone dovrebbe essere allestita fuori dalla stanza sterile. La porta della stanza del cuscinetto e la porta della stanza sterile non dovrebbero affrontare la stessa direzione per impedire al flusso d'aria di portare batteri vari. Sia la stanza sterile che la stanza del cuscinetto devono essere ermetiche. L'attrezzatura per ventilazione interna deve avere dispositivi di filtrazione dell'aria. The floor and walls of the sterile room must be smooth, difficult to harbor dirt and easy to clean. The work surface should be level. Sia la stanza sterile che la stanza del cuscinetto sono dotate di luci ultraviolette. Le luci ultraviolette nella stanza sterile sono a 1 metro di distanza dalla superficie di lavoro. Il personale che entra in camera sterile dovrebbe indossare abiti e cappelli sterilizzati.
Attualmente, le stanze sterili esistono principalmente nelle fabbriche di microbiologia, mentre i laboratori generali usano una panchina pulita. La funzione principale della panchina pulita è quella di utilizzare il dispositivo di flusso d'aria laminare per rimuovere varie piccole polveri tra cui microrganismi sulla superficie di lavoro. Il dispositivo elettrico consente all'aria di passare attraverso il filtro HEPA e quindi di entrare nella superficie di lavoro, in modo che la superficie di lavoro sia sempre mantenuta sotto il controllo dell'aria sterile fluente. Inoltre, c'è una tenda d'aria ad alta velocità sul lato vicino all'esterno per impedire l'ingresso dell'aria batterica esterna.
In alcuni punti con condizioni difficili, è possibile utilizzare scatole sterili in legno invece di pulire la panca. La scatola sterile ha una struttura semplice ed è facile da spostare. Ci sono due fori nella parte anteriore della scatola, che sono bloccati dalle porte a push quando non sono in funzione. Puoi estendere le braccia durante il funzionamento. La parte superiore della parte anteriore è dotata di vetro per facilitare il funzionamento interno. C'è una lampada ultravioletta all'interno della scatola e utensili e batteri possono essere messi attraverso la piccola porta sul lato.
Le tecniche operative asettiche attualmente non solo svolgono un ruolo fondamentale nella ricerca e nelle applicazioni microbiologiche, ma sono anche ampiamente utilizzate in molte biotecnologie. Ad esempio, tecnologia transgenica, tecnologia anticorpale monoclonale, ecc.
Tempo post: MAR-06-2024