Nelle camere bianche esistono due principali fonti di contaminazione: particelle e microrganismi, che possono essere causati da fattori umani e ambientali, o da attività correlate al processo. Nonostante i migliori sforzi, la contaminazione penetrerà comunque all'interno della camera bianca. Tra i vettori di contaminazione più comuni si annoverano corpi umani (cellule, capelli), fattori ambientali come polvere, fumo, nebbie o attrezzature (attrezzature di laboratorio, attrezzature per la pulizia) e tecniche di pulizia e metodi di pulizia inadeguati.
Il principale veicolo di contaminazione è rappresentato dalle persone. Anche con gli indumenti e le procedure operative più rigorose, gli operatori non adeguatamente formati costituiscono la maggiore minaccia di contaminazione nelle camere bianche. I dipendenti che non rispettano le linee guida per le camere bianche rappresentano un fattore di rischio elevato. Anche un solo errore o una dimenticanza da parte di un dipendente possono contaminare l'intera camera bianca. L'azienda può garantire la pulizia della camera bianca solo attraverso un monitoraggio continuo e un aggiornamento costante della formazione, con un tasso di contaminazione pari a zero.
Altre importanti fonti di contaminazione sono gli strumenti e le attrezzature. Se un carrello o un macchinario vengono puliti solo superficialmente prima di entrare in una camera bianca, possono introdurre microrganismi. Spesso, gli operatori non si rendono conto che le attrezzature su ruote, mentre vengono spinte all'interno della camera bianca, passano sopra superfici contaminate. Le superfici (inclusi pavimenti, pareti, attrezzature, ecc.) vengono regolarmente testate per la conta batterica vitale utilizzando piastre di contatto appositamente progettate contenenti terreni di coltura come l'agar tripticase soia (TSA) e l'agar destrosio di Sabouraud (SDA). Il TSA è un terreno di coltura progettato per i batteri, mentre l'SDA è un terreno di coltura progettato per muffe e lieviti. Il TSA e l'SDA vengono in genere incubati a temperature diverse: il TSA viene esposto a temperature comprese tra 30 e 35 °C, che rappresentano la temperatura di crescita ottimale per la maggior parte dei batteri. L'intervallo tra 20 e 25 °C è ottimale per la maggior parte delle specie di muffe e lieviti.
Un tempo il flusso d'aria era una causa comune di contaminazione, ma i moderni sistemi HVAC per camere bianche hanno praticamente eliminato questo problema. L'aria nelle camere bianche viene controllata e monitorata regolarmente (ad esempio, giornalmente, settimanalmente, trimestralmente) per quanto riguarda la concentrazione di particelle, la carica batterica, la temperatura e l'umidità. I filtri HEPA vengono utilizzati per controllare la concentrazione di particelle nell'aria e sono in grado di filtrare particelle fino a 0,2 µm. Questi filtri vengono solitamente mantenuti in funzione ininterrottamente a una portata calibrata per preservare la qualità dell'aria nella stanza. L'umidità viene generalmente mantenuta a un livello basso per prevenire la proliferazione di microrganismi come batteri e muffe che prediligono ambienti umidi.
In realtà, il livello più alto e la fonte più comune di contaminazione in una camera bianca è l'operatore.
Le fonti e le vie di ingresso della contaminazione non variano in modo significativo da un settore all'altro, ma esistono differenze tra i settori in termini di livelli di contaminazione tollerabili e intollerabili. Ad esempio, i produttori di compresse ingeribili non devono mantenere lo stesso livello di pulizia dei produttori di farmaci iniettabili che vengono introdotti direttamente nel corpo umano.
Le aziende farmaceutiche hanno una tolleranza inferiore alla contaminazione microbica rispetto alle aziende produttrici di elettronica ad alta tecnologia. I produttori di semiconduttori, che realizzano prodotti microscopici, non possono accettare alcuna contaminazione da particolato per garantire la funzionalità del prodotto. Pertanto, queste aziende si preoccupano solo della sterilità del prodotto da impiantare nel corpo umano e della funzionalità del chip o del telefono cellulare. Sono relativamente meno preoccupate per muffe, funghi o altre forme di contaminazione microbica nelle camere bianche. D'altro canto, le aziende farmaceutiche si preoccupano di tutte le fonti di contaminazione, sia viventi che morte.
L'industria farmaceutica è regolamentata dalla FDA e deve attenersi rigorosamente alle norme di Buona Fabbricazione (GMP), poiché le conseguenze della contaminazione in questo settore sono molto gravi. I produttori di farmaci non solo devono garantire che i loro prodotti siano privi di batteri, ma sono anche tenuti a documentare e tracciare ogni aspetto. Un'azienda produttrice di apparecchiature ad alta tecnologia può spedire un computer portatile o un televisore purché superi i controlli interni. Per l'industria farmaceutica, invece, la situazione è ben diversa: per questo motivo, è fondamentale che un'azienda disponga, utilizzi e documenti procedure operative per le camere bianche. Per ragioni di costo, molte aziende si affidano a servizi di pulizia professionali esterni.
Un programma completo di test ambientali per camere bianche dovrebbe includere particelle aerodisperse visibili e invisibili. Sebbene non sia obbligatorio identificare tutti i contaminanti presenti in questi ambienti controllati tramite microrganismi, il programma di controllo ambientale dovrebbe prevedere un livello adeguato di identificazione batterica degli estratti dei campioni. Attualmente sono disponibili numerosi metodi di identificazione batterica.
Il primo passo nell'identificazione batterica, soprattutto in caso di isolamento in camera bianca, è la colorazione di Gram, che può fornire indizi interpretativi sull'origine della contaminazione microbica. Se l'isolamento e l'identificazione microbica mostrano cocchi Gram-positivi, la contaminazione potrebbe provenire da esseri umani. Se l'isolamento e l'identificazione microbica mostrano bacilli Gram-positivi, la contaminazione potrebbe provenire da polvere o da ceppi resistenti ai disinfettanti. Se l'isolamento e l'identificazione microbica mostrano bacilli Gram-negativi, la fonte di contaminazione potrebbe provenire da acqua o da qualsiasi superficie umida.
L'identificazione microbica nelle camere bianche farmaceutiche è fondamentale in quanto correlata a numerosi aspetti della garanzia di qualità, come i bioassay negli ambienti di produzione; i test di identificazione batterica dei prodotti finali; la ricerca di microrganismi non identificati in prodotti sterili e acqua; il controllo di qualità delle tecnologie di conservazione per la fermentazione nell'industria biotecnologica; e la verifica dei test microbiologici durante la validazione. Il metodo FDA per confermare la capacità dei batteri di sopravvivere in un ambiente specifico diventerà sempre più comune. Quando i livelli di contaminazione microbica superano i limiti specificati o i risultati dei test di sterilità indicano una contaminazione, è necessario verificare l'efficacia degli agenti di pulizia e disinfezione ed eliminare le fonti di contaminazione.
Esistono due metodi per monitorare le superfici ambientali delle camere bianche:
1. Piastre di contatto
Queste speciali piastre di coltura contengono un terreno di coltura sterile, preparato in modo da superare il bordo della piastra. Il coperchio della piastra di contatto copre la superficie da campionare e tutti i microrganismi visibili sulla superficie aderiranno alla superficie dell'agar e verranno incubati. Questa tecnica permette di visualizzare il numero di microrganismi presenti su una superficie.
2. Metodo del tampone
Questo metodo è sterile e il tampone viene conservato in un liquido sterile idoneo. Il tampone viene applicato sulla superficie da analizzare e il microrganismo viene identificato recuperando il tampone nel terreno di coltura. I tamponi sono spesso utilizzati su superfici irregolari o in aree difficili da campionare con una piastra a contatto. Il campionamento con tampone è un test prevalentemente qualitativo.
Data di pubblicazione: 21 ottobre 2024